8912240188 61 دانشگاه علوم پزشكي گلستان مركز تحقيقات علوم اعصاب Long-term effects of MDMA on memory and the amount of dopamine receptor gene expression in adult male wistar rat hippocampus بررسي اثرات مصرف طولاني مدت MDMA بر حافظه و ميزان بيان ژن گيرنده هاي دوپامين در Hippocampus موش هاي صحرايي نر بالغ نژاد ويستار Methylendioxymetamphetamine-4.3 (MDMA) با نام تجاري اكستازي يكي از مشتقات آمفتاميني است كه اثرات توهم زايي، ترس، افزايش حساسيت به رنگها، افزايش تحريك پذيري و ... داشته و باعث اختلالاتي در حافظه و يادگيري و مسائل رفتاري مي شود. از طرفي نورونهاي دوپامينرژيك مناطقي از مغز كه در ارتباط با حافظه و يادگيري هستند نظير هيپوكامپ و هيپوتالاموس به صورت آسيب به پايانه هاي آكسوني نيز تحت تأثير قرار مي گيرند.
مطالعات فارماكولوژيك و ايمنوهيستوشيمي نشان داده اند كه MDMA ميزان ترشح نوروترنسميتر منوآميني نظير دوپامين، سروتونين و استيل كولين را افزايش مي دهد، از طرفي مشخص شده كه فعاليت گيرنده هاي دوپاميني با اعتياد دارويي ارتباط دارد.
اثرات سلولي و مولكولي MDMA يكي از زمينه هاي تحقيقي جديد بوده و هنوز اطلاعات مشخصي در مورد اثرات آن در ميزان بيان ژنها وجود ندارد و به نظر مي رسد MDMA باعث تغيير در بيان گيرنده هاي دوپامينرژيك در مغز شود مصرف طولاني مدت MDMA ؛حافظه ؛ميزان بيان ژن گيرنده هاي دوپامين؛Hippocampus ؛موش هاي نر ويستار 1300147200 10 از آنجاييكه به نظر مي رسد MDMA باعث تغيير در بيان گيرنده هاي دوپامينرژيك در مغز مي شود، از اين رو هدف از انجام اين مطالعه بررسي اثرات مصرف MDMA در ميزان بيان ژن گيرنده هاي دوپاميني در منطقه اي از مغز مانند هيپوكامپ است كه در فرايندهاي rewarding و locomotion و حافظه دخالت دارد. الف) اهداف اصلي طرح:
تعيين اثرات مصرف طولاني مدت دوزهاي متفاوت MDMA بر حافظه و بيان ژن گيرنده هاي D1 و D4 و D5 دوپامين در Hippocampusدر مغز موش هاي صحرايي نر بالغ نژاد ويستار

ب) اهداف ويژه طرح:
1. تعيين و مقايسه اثر دوزهاي متفاوت (mg/kg 0/10 و 0/5 و 5/2 و 0/0)MDMA بر يادگيري اجتنابي مهاري با استفاده از دستگاه (shuttle box)
2. تعيين و مقايسه اثر دوزهاي متفاوت (mg/kg 0/10 و 0/5 و 5/2 و 0/0)MDMA بر ميزان بيان ژن گيرنده D1 دوپامين در hippocampus مغز
3. تعيين و مقايسه اثر دوزهاي متفاوت (mg/kg 0/10 و 0/5 و 5/2 و 0/0) MDMA بر ميزان بيان ژن گيرنده D4 دوپامين در hippocampus مغز
4. تعيين و مقايسه اثر دوزهاي متفاوت (mg/kg 0/10 و 0/5 و 5/2 و 0/0) MDMA بر ميزان بيان ژن گيرنده D5 دوپامين در hippocampus مغز


ج) هدف كاربردي :
با انجام اين مطالعه و پس از تعيين اختلالات رفتاري و تغييرات مولكولي گيرنده هاي دوپاميني هيپوكامپ تحت تاثير مصرف طولاني مدت MDMA و پس از آزمايشات كارآزمايي باليني توسط محققين مربوطه به كلنيك هاي درمان اعتياد ارائه مي شود. در اين تحقيق 50 سر موش هاي صحرايي بالغ نژاد ويستار استفاده مي شود كه از موسسه پاستور (تهران- ايران) خريداري خواهند شد. پس از ورود به مدت يك هفته نگهداري شده تا با شرايط حيوان خانه كه شامل حرارت 23_٢١ درجه سانتي گراد وشرايط نوري ١٢ ساعت روشنايي- ١٢ ساعت تاريكي بوده ، سازگار شوند. ضمن اينكه آب و غذا نيز به اندازه كافي در اختيار آنها قرار داده مي شود.
دستگاه يادگيري اجتنابي مهاري (غير فعال) (avoidance apparatus inhibitory (passive))، مدل Step-Through، از جعبه اي تشكيل شده كه به وسيله يك ديواره به دو قسمت با اندازه يكسان (٢٠×٢٠×٣٠ سانتيمتر) تقسيم مي شود. درون ديوار بين دو قسمت درب گيوتيني به ابعاد ٩×٧ سانتيمتر تعبيه شده است كه مي توان در موقع لزوم آنرا برداشت. اين دستگاه داراي بخشي سفيد مي باشد كه كف و ديواره هاي آن از جنس پلكسي گلاكس سفيد ساخته شده و فاقد سقف بوده كه توسط نور غير مستقيم لامپ مهتابي زرد رنگ روشن مي شود. بخش ديگر دستگاه سياه رنگ است. در كف اين قسمت ميله هاي فولادي با فاصله يك سانتيمتر از هم قرار مي گيرند كه اين ميله ها توسط سيم رابطي به دستگاه استيمولاتور متصل مي شوند و عمل انتقال شوك الكتريكي به حيوانات مورد آزمايش را ممكن مي سازند.
تمام رتها در گروه هاي آزمايشي دارو را بصورت IP هر ٧ روز يكبار (٣ بار در روز به فاصله ٣ ساعت) براي مدت ٤ هفته دريافت مي كنند. توجيه استفاده از اين دوز بر اساس وضعيتهاي انساني است. به عبارتي ميزان مصرف MDMA در انسان mg١٦٠-٥٠ در هر بار مصرف است كه برابر با دوز mg/kg 5 در رت 200 گرمي مي باشد .
تمام حيوانات يك روز بعد از آخرين مرحله تزريق در هفته چهارم و پس از انجام تست رفتاري به روش cervical dislocation كشته شده و هيپوكامپ آنها جدا مي گردد. براي تشريح مغز حيوانات از اطلس استفاده مي شود.

تعيين ميزان بيان ژن گيرنده هاي D1 و D4 و D5 دوپاميني در hippocampus هاي جمع آوري شده در مرحله قبل با استفاده از Real Time RT-PCR

1- استخراج mRNA: پس از جداسازي هيپوكامپ از مغز حيوانات در تمام گروه ها ، با استفاده از RNeasy kit استخراج مي شود.
2- نسخه برداري معكوس، ساخت cDNA با استفاده از mRNA حاصل از مرحله قبل بوسيلهsensicript kit برطبق دستورالعمل مربوطه انجام مي گيرد.
3- Real time – PCR: با استفاده از كيت SYBR Green PCR core reagent ،cDNA ساخته شده را به همراه Master mix مربوطه در دستگاه (USA،ABI)بنياد RT-PCR قرار داده تا ميزان بيان ژن گيرنده هاي D1 و D4 و D5 را تعيين كنيم. بمنظور نرماليزاسيون در انجام اين بخش ازآزمايشات از S18 RNA استفاده شد. 72377000 دانشگاه علوم پزشكي گلستان 1300147200 0 بلي بلي فعال و منتشر شده 1309910400